在顯微鏡學中,強度(亮度)和/或顏色的差異會形成對比,使樣本中的特徵與細節得以顯現。一般而言,要讓人眼能夠將物體從背景中辨識出來,或能辨別結構中的細微差異,對比度至少需達到 2%。然而,對於其他偵測器(例如攝影機或光偵測器),此對比需求可能會有所不同。單一活細胞本質上是無色且透明的,因此難以直接觀察。雖然染料可以提升對比度,但在 ART(輔助生殖技術) 中不能使用,因為這些染劑會損害細胞健康與活性。然而,光與細胞的互動並非只有吸收作用,像 光散射、繞射等現象也可以應用於顯微技術中,以提升對比度而不會影響細胞的存活。因此,ART 實驗室通常配備多種複式與立體顯微鏡系統,並搭配各式不同的對比增強技術,以取得最佳的影像觀察效果。
在生殖醫療中,非常常見的一種技術是單一精子顯微注射,利用微操作系統將一個精子注射進卵母細胞中。為了成功進行精子注射,必須能清楚觀察卵母細胞上的結構,例如 透明帶和極體。使用 ZEISS 顯微鏡時,可運用多種對比技術,如 iHMC、PlasDIC、DIC 或 圓偏光(circular polarization) 來觀察紡錘體與相關結構,以提供所需的資訊。
(1)精液分析:整體精子質量的評估是在進行任何受精程序之前最重要的一步。精液分析(seminogram)評估總體積、每毫升(ml)活動精子的數量和精子形態。
(2) 卵母細胞評估:在進行受精前,評估卵母細胞的成熟度和品質是至關重要的。使用高對比度顯微鏡技術,可以清晰地觀察卵母細胞的結構,如透明帶、極體和紡錘體,這些都是評估卵母細胞健康狀態的重要指標。
(3)精子注入:PlasDIC 顯微鏡提供清晰的浮雕對比效果及擬三維影像(圖 6)。透明帶、卵母細胞膜以及顯微操作吸管的細節都能清楚呈現。因此,PlasDIC 特別適合用於觀察 ICSI 過程,因為可以使用標準的塑料實驗器材。
(4)胚胎观察:成功受精後,胚胎學家會在接下來的數日中監測胚胎發育情況。此外,胚胎也會接受形態學評估,並且只有評級較高的胚胎才會被選擇進行植入。霍夫曼調制對比顯微鏡HMC是在體外生殖(ART)中使用倒置顯微鏡時最廣泛應用的對比技術,因為它在解析度與對比度之間提供了良好的折衷。此對比技術常規用於 ICSI 觀察和胚胎質量評估。HMC 不使用分光棱镜,兩個偏振片光學上安裝在樣品之前;因此,HMC 可以與雙折射樣品及塑料培養皿等材料結合使用。ZEISS 改良版 HMC(iHMC)提供清晰的浮雕對比,甚至能顯示細胞核中的最細微結構、核形狀以及核仁。
以下是4種顯微分析技術的原理圖對比: